鮭魚(yú)精DNA作為分子雜交、競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合和穩(wěn)定性研究的常用輔助試劑，其純度、濃度與儲(chǔ)存穩(wěn)定性都會(huì)直接決定實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和信噪比，可從以下三方面理解：
1、純度
-雜質(zhì)（蛋白、RNA、寡糖、內(nèi)毒素）會(huì)競(jìng)爭(zhēng)探針或藥物的結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致背景升高、結(jié)合常數(shù)被低估。
-電泳或光譜實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)“拖尾”、額外吸收峰，往往提示純度＜95%。
-高純度（≥95%）的鮭魚(yú)精DNA在紫外-可見(jiàn)掃描中A260/A280≈1.85、A260/A230≥2.0，可滿(mǎn)足大多數(shù)DNA-藥物相互作用、穩(wěn)定性及探針?lè)忾]實(shí)驗(yàn)的要求。
2、濃度
-作為封閉劑時(shí)，常用終濃度50–200µgmL?¹；濃度過(guò)低（<20µgmL?¹）封閉不充分，膜雜交或FISH會(huì)出現(xiàn)非特異斑點(diǎn)；濃度過(guò)高（>500µgmL?¹）則探針有效濃度被稀釋?zhuān)盘?hào)反而下降。
-在DNA-金屬/藥物相互作用研究中，濃度過(guò)低會(huì)使結(jié)合峰差值過(guò)小、Δε值誤差大；濃度太高又易產(chǎn)生內(nèi)濾效應(yīng)，使紫外差分光譜失真。文獻(xiàn)常用1–5×10??molL?¹（以磷計(jì)）作為最佳區(qū)間。
-儀器定量線(xiàn)性范圍需預(yù)先校驗(yàn)：超微量分光光度計(jì)對(duì)鮭魚(yú)精DNA在5ngµL?¹–2000ngµL?¹呈理想線(xiàn)性（R²≥0.999），低于5ngµL?¹時(shí)誤差顯著增大。
3、穩(wěn)定性
-溶液狀態(tài)：4℃存放不宜超過(guò)1周，-20℃分裝可保存3–6個(gè)月；反復(fù)凍融>5次會(huì)出現(xiàn)剪切降解，表現(xiàn)為粘度下降、A260升高。
-干燥粉末：避光、干燥、-20℃密封可穩(wěn)定2年以上；受潮或室溫放置1個(gè)月后，GC區(qū)易發(fā)生脫嘌呤，熱變性溫度（Tm）降低2–4℃。
-穩(wěn)定性下降會(huì)直接影響Tm值、圓二色性（CD）信號(hào)及與金屬/藥物的結(jié)合常數(shù)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性差。
操作建議
1、購(gòu)入后先測(cè)純度（A260/A280、A260/A230、瓊脂糖條帶完整性），不滿(mǎn)足要求時(shí)再用酚-氯仿抽提或樹(shù)脂柱純化。
2、按單次用量（如1mgmL?¹，50µL/管）分裝，-20°C避光保存；使用前65°C加熱5min快速退火，可減少聚集。
3、封閉或結(jié)合實(shí)驗(yàn)前，用0.22µm過(guò)濾除菌并測(cè)定實(shí)際濃度，以消除凍存稀釋誤差。
只要控制純度≥95%、工作濃度落在儀器/方法驗(yàn)證過(guò)的線(xiàn)性區(qū)間，并采用“分裝-冷凍-避免反復(fù)凍融”原則，鮭魚(yú)精DNA就能在雜交、封閉及相互作用研究中提供穩(wěn)定、可重復(fù)的背景。
