諾博萊德 SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)

SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)   凝膠配制

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本試劑為配制SDS-PAGE濃縮膠緩沖液，可用于配制各種濃度的變性及非變性PAGE凝膠，方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS，使用時(shí)不用另外加入。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、 凝膠模具

2、 Acr-Bis(30%,29:1)

3、 10%APS(過硫酸銨)

4、 TEMED

5、 蒸餾水

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

操作步驟(僅供參考)：

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度，優(yōu)良膠濃度請(qǐng)參考附表1。

(一)灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)

1、參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。(注：加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸，是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。)

2、將不同體積的Acr-Bis(30%,29:1)、分離膠緩沖液和蒸餾水在小燒杯或試管中混合。

3、加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端

1.5 cm或距梳齒約0.5cm即可)，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1～2cm的水層，

使凝膠表面保持平整。

6、 靜置30～60min，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，表面凝膠已聚合。

(二)灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)

1、小心傾倒出覆蓋在分離膠上的水層。

2、將不同體積的Acr-Bis(30%,29:1)、濃縮膠緩沖液和蒸餾水在一個(gè)小燒杯或試管中混

合。

3、加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。

4、將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。

5、將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

6、靜置10~20min，等待濃縮膠聚合。

7、待凝膠聚合后，小心地拔出梳子，以免破壞加樣孔。

8、進(jìn)行常規(guī)電泳操作。

注意事項(xiàng)：

1、 過硫酸銨配制成10%溶液后應(yīng)當(dāng)-20℃保存。應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間以防失效。有效避免失效的方法是分成小份，-20℃保存，用2~3次，剩余的棄用，亦可4℃保存幾天。

2、 TEMED易揮發(fā)，使用后請(qǐng)蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關(guān)系密切，可通過適當(dāng)調(diào)節(jié)TEMED的用量，控制在不同的室內(nèi)環(huán)境下凝膠凝聚的速度。

3、 配制聚丙烯凝膠的過程中，如果室溫較低，可以置于37℃放置，加速凝固。

4、 Acr-Bis(30%,29:1)有輕微神經(jīng)毒性，請(qǐng)小心操作。

5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 3個(gè)月有效。

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