諾博萊德  病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒

病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒 質(zhì)粒提取

產(chǎn)品貨號(hào)：D0298

產(chǎn)品名稱：病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：100T/50T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderD0298  病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取病毒 DNA/RNA，不適合于細(xì)胞等組織內(nèi)病毒 DNA/RNA 的提取。

使用本試劑盒提取的基因組 DNA/RNA 可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、RT-PCR 實(shí)驗(yàn)等。

操作步驟（僅供參考）：

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入一瓶新開啟的無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽，蓋好搖勻。所有離心步驟均在2-8℃條件下進(jìn)行。

1.取病毒上清液0.5mL，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀（如無(wú)沉淀可省去此步）。

2.向病毒上清中加入20μL 10mg/mL的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。

3.吸附柱前處理：從包裝中取出吸附柱，放入收集管中，加入700μL預(yù)洗液，室溫放置2min，2-8℃，12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中待用。

4.向病毒上清中加入500μL結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入400μL無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA/RNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入處理好的吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的最大容積為750μL，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。）

5.12000rpm 離心 2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入700μL漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

7.向吸附柱中加入500μL漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

8.12000rpm 離心 2min，將吸附柱置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

9. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中央懸空滴加50μL-100μL經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的RNase free ddH2O，室溫放置 5min，12000rpm 離心 2min。即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA/RNA。

注意事項(xiàng)：

1.經(jīng)常更換新手套。因?yàn)槠つw經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase污染。使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭避免交叉污染。提取RNA時(shí)最好在RNase free的環(huán)境中操作。

2.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA/RNA提取量也下降。

3.若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解。

4.如果樣品消化不che底，后面的離心步驟中可能會(huì)出現(xiàn)堵柱子的情況，可適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。

5.洗脫緩沖液的體積最好不少于50μL，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率。

6.提取產(chǎn)物應(yīng)保存在-70℃，以防基因組降解。

7.RNA 檢測(cè)：得到的基因組 RNA 片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。由于病毒不含有核糖體RNA，所以常規(guī)電泳無(wú)法檢測(cè)，只有后期實(shí)驗(yàn)才可檢測(cè)到。D260值為1相當(dāng)于大約40μg/mL單鏈RNA。

8.DNA 檢測(cè)：得到的基因組DNA片段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D260值為1.0 相當(dāng)于大約50μg/mL 雙鏈DNA、40μg/mL 單鏈 DNA。如果病毒含量過(guò)低，最后提取的基因組DNA電泳可能無(wú)法檢測(cè)到，但PCR等其他實(shí)驗(yàn)還會(huì)有結(jié)果。

病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒 質(zhì)粒提取

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D0298  病du基因組DNA/RNA提qu試劑盒  100T/50T