諾博萊德West Femto ECL超敏發光液,West Femto ECL Substrate

West Femto ECL超敏發光液 顯色與信號檢測

產品貨號：PE8818

產品名稱：West Femto ECL超敏發光液,West Femto ECL Substrate

產品規格：2*12.5ml / 2*50ml

產品簡介：

英文名稱：West Femto ECL Substrate

中文名稱：West Femto ECL超敏發光液

規格：2*12.5ml ; 2*50ml

純度：＞99%

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品介紹：

NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏發光液,West Femto ECL Substrate用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關聯的抗原。由于采用了du特的發光底物系統，West Femto ECL超敏發光液是目前zui靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑：
(1) 具有ji高靈敏度和高信噪比，可檢測10～100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進行發光操作;
(3) 發光迅速，熒光可使X光膠片感光達12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000～1:10000)，極其節省抗體。
2. 用途：用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執行常規SDS-PAGE、轉膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生wu素-HRP夾法。
(2)Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜wan全干燥。將膜wan全浸入發光工作液(0.125mL發光工作液/cm2膜)中，與發光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。
(4)用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。
(5)打開X光膠片暗盒，在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來wan全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。
(6)暗房內壓X光膠片，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。
4. 儲存：4  ℃密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性：無特殊毒性，按普通化學品處理。
6. 注意事項：
(1)步驟1～5可在日光燈下操作;但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發光和曝光。
(4)由于超敏發光液極其靈敏，強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

 備注：產品信息可能會有優化升級。請以實際標簽信息為準。    

操作概述：

注：優化抗原和抗體的濃度。必須使用建議的抗體稀釋度，以保證陽性結果。有關建議的稀釋度范圍請參考其他所需材料。

1) 將一抗濃度稀釋到 1ng 至 0.2 μg/mL（以 1 μg/mL 儲存液稀釋 1:5,000 至 1:100,000 倍）

2) 將二抗濃度稀釋到 2ng 至 10 ng/mL（以 1 μg/mL 儲存液稀釋 1:100,000 至 1:500,000 倍）

3) 將兩種底物組份按 1:1 比例混合，制備底物工作液。注：暴漏于日光或任何其他強光可能損害工作液，為獲得最佳結果，將此工作液保存在琥珀色瓶中， 并避免長期暴漏于任何強光。短時間暴漏于實驗室常規照明不會損害該工作液。

4) 將印跡膜在 West Femto ECL 底物工作液中孵育 5 分鐘。

5) 吸出多余試劑。用清潔的塑料膜蓋住該印跡膜。

6) 使印跡膜在 X 光膠片上曝光

蛋白印跡法詳細操作步驟

1) 將印記膜從蛋白轉印設備中取出，加入合適的封閉液在溫室下孵育 20-60 分鐘，同時振蕩。以 封閉膜上非特異性蛋白結合位點。 請注意：使用在前文建議的抗體稀釋度是非常重要的。

2) 將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育 1 小時，同時振蕩；或在 28℃孵育過夜，不振蕩。

3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜wan全覆蓋。振蕩孵育≥5 分鐘，更換洗滌緩沖液 并重復該步驟 4-6 次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。

注：孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率。 請注意：使用在前文建議的 HRP 標記二抗稀釋度是非常重要的。

4) 將 HRP 標記的二抗工作液與膜在溫室孵育 1 小時，同時振蕩。

5) 重復步驟 3，以除去未結合的 HRP 標記二抗。

注：膜與 HRP 標記二抗孵育后必須進行che底洗滌。

6) 將 A 溶液與 B 液等比例混合，制備成工作液。每 cm2膜使用 0.01～0.1ml 工作液。工作液可以 在溫室下穩定 8 小時。

注：暴漏雨日光或任何其他強光下可能損害工作液，為獲得嘴角結果，將此工作液保存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏雨任何強光。實驗室的常見照明不會損害工作液。

7) 將印記膜在工作液中孵育 5 分鐘。

8) 從工作液中取出印記膜，并置于一個塑料片或清潔的塑料紙（膜）中，用一張吸水紙吸除多余的液體，并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

9) 將包在塑料紙（膜）中的印記膜置于膠片暗盒中，蛋白質面朝上，除適用于膠片曝光的燈（如紅色安全燈）之外，關閉所有的燈。注意：膠片必須在曝光期間保持干燥，為獲得最佳效果，采取以下措施：

* 確保將多余的底物從膜和塑料紙上wan全去除。

* 在整個膠片處理期間，使用手套。

* 切莫將印記膜置于已顯影的膠片上，因為膠片上的化學物質會減弱信號。

10) 將 X 光膠片置于膜的上面。建議第一次曝光 60 秒。之后可調整曝光時間以達到最佳結果。化學發光反應在底物孵育后的前 5-30 分鐘期間是zui強烈的。這一反應可以持續幾個小時，但強度會隨時間下降，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用 磷光存儲成像設備（如 Bio-Rad 的分子成像儀系統）或 CCD 照相機可能需要較長的曝光時間。

注意：膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。

11) 使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號太強，則縮短曝光時間或將印記膜進行剝離并降低抗體濃度重新檢測。

West Femto ECL超敏發光液 顯色與信號檢測

產品訂購信息：

NobleRyder PE8818 West Femto ECL超敏發光液,West Femto ECL Substrate 2*12.5ml / 2*50ml