諾博萊德 血小板膜蛋白提取試劑盒

血小板膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品貨號：P4918

產品名稱：血小板膜蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：血小板膜蛋白提取試劑盒

規格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P4918 血小板膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：動物血小板

產品介紹

血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品介紹：

血小板膜蛋白提取試劑盒適用于從各種動物血小板中提取膜蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產品特點：

1. 使用方便，將蛋白提取的時間縮短至30min。

2. 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

3. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

操作步驟：

一、使用注意事項

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

4. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

5. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

6. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

7. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

8. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

9. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

二、血小板膜蛋白提取

1. 提取液準備：

每500μL冷的蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每500μL蛋白溶解液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取1-5mLACD抗凝血，室溫200g離心10min。

3. 收集上層血漿，棄下層血液細胞沉淀。

4. 上層血漿室溫3000g離心10min，棄上清，收集沉淀。

5. 沉淀中加入500μL提取液B洗滌一次，3000g離心10min，棄上清，收集沉淀。

6. 沉淀中加入300-500μL冷的蛋白提取液A，充分混勻后，在4℃條件下振蕩20-30min。

7. 在4℃，12000g條件下離心10min，取上清。

8. 在37℃水浴10min。

9. 在37℃，1000g離心3min。

10. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部的下層，大約30-50μL液體。

11. 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液C溶解該液體，即得血小板膜蛋白樣品。

12. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低?

血小板膜蛋白豐度較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大血小板的上樣量。

處理部分組織樣本時可能沒有裂解wan全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白?

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3. 提取的蛋白具有活性嗎?

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

4. 膜蛋白電泳沒有條帶?

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。

膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。

蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保溫30min。

蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。

有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

電泳時最后采用低電壓低電流電泳。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸

血小板膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品訂購信息：

P4918  血小板膜蛋白提取試劑盒  50T/100T