諾博萊德 OrigamiB(DE3)plysS 感受態細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

OrigamiB(DE3)plysS 感受態細胞 載體構建

產品貨號：C1508

產品名稱：OrigamiB(DE3)plysS 感受態細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

英文名稱：OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

產品規格：20*100ul

產品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸，單加10kg干冰費

儲存條件：-70℃

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyderC1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態細OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell W3110(DE3)來源于K-12菌株，細菌的染色體DNA上整合了T7 RNA聚合酶(T7RNP)表達框原件，T7RNP位于lacUV5啟動子下，可表達T7 RNA聚合酶。pET、pGEX、pMAL等原核表達載體可使用該菌株進行外源重組蛋白的表達。W3110(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19 質粒檢測轉化效率大于1×106 cfu/μg DNA。

操作步驟：  

1. 質粒轉化步驟

1) 將感受態細胞置于冰水浴中化凍。待細胞剛化凍后，加入目的質粒到細胞中，用手指bo打管底，輕輕混勻；

2) 冰水浴中放置30分鐘，不要晃動；

3) 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動；

4) 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動；

5) 加入500μl無菌的SOC或LB培養基；

6) 置于37℃搖床中，150-200rpm震蕩復蘇培養60分鐘；

7) 取50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養12-16小時。

（平板劃線分離法：復蘇培養結束后，12000rpm離心30秒鐘，棄掉上清，留100μl左右的液體，用200μl 吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μl重懸的菌液分多點滴在平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

（質粒快速轉化步驟：將步驟2的時間縮短到5分鐘，對于氨芐青mei素抗性的質粒，步驟4完成后，可直接涂布或劃線于含氨芐青mei素抗性的LB平板上。其它抗性的質粒仍需60分鐘的復蘇培養。）

2. 蛋白表達步驟

1) 挑取單菌落，接種到含5ml帶抗生素的LB培養基中；

2) 37℃，200rpm震蕩培養細菌至對數生長期（OD600=0.4-0.8）；

3) 加入IPTG到終濃度為0.4mM，37℃誘導2-4小時或16℃誘導過夜；

4) 誘導完成后，離心收集菌體，用合適的方法（如考馬斯亮藍染膠法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌體裂解物的總蛋白、上清和沉淀組分，明確表達產物的表達狀況（可溶性或不溶性表達）；

5) 大量表達時，可用10ml過夜培養物轉接到1L培養基中，當培養到OD600=0.4-0.8時，加入終濃度為0.4mM的IPTG，37℃誘導2-4小時或16℃誘導過夜（不同蛋白表達的優良條件有所不同，需在實驗中優化）。

注意事項：

1. 我司生產的生化試劑如無特殊標注，基本為非無菌包裝，若用于細胞實驗，請提前做好預處理。

2. 一旦配成溶液，請分裝保存，避免反復凍融造成的產品失效。

3. 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。

4. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。

OrigamiB(DE3)plysS 感受態細胞 載體構建

產品訂購信息

C1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受態細胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell  20*100ul