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Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建
簡要描述:

產(chǎn)品貨號:C9938
產(chǎn)品名稱:Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品規(guī)格:10×100μl
產(chǎn)品簡介:
儲存條件:-70℃
Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

  • 產(chǎn)品型號:C9938
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2025-07-14
  • 訪  問  量:237
詳情介紹

諾博萊德 Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

 

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞   載體構(gòu)建

產(chǎn)品貨號:C9938

產(chǎn)品名稱:Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格:10×100μl

產(chǎn)品簡介:

儲存條件:-70℃

 

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyderC9938 Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞 LacYZ 突變型 BL21(DE3)菌株。Tuner(DE3)菌株可利用 IPTG 的加入量來精準(zhǔn)地控制重組蛋白的表達(dá)量,與pET 系列載體聯(lián)合使用,可以使得蛋白表達(dá)從低表達(dá)水平到高表達(dá)水平進(jìn)行有效調(diào)控(使用低濃度的IPTG 誘導(dǎo)重組蛋白低水平表達(dá)時,目的蛋白可能會具有更好的可溶性和生物活性)。該菌株含有λ噬菌體DE3區(qū),可以表達(dá)T7RNA 聚合酶。Tuner(DE3)菌株屬于B菌株,lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型。Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制成,pUC19 質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)107cfu/μgDNA。

基因型:F-ompThsdSB(rB-mB-) gal dcmlacY1 (DE3)

菌株抗性:對氨芐青mei素、卡那mei素、氯mei素和四環(huán)素敏感。

操作方法:(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)

(以氨芐青mei素抗性的 pET 質(zhì)粒為例)

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后,加入1-5μL含有1-100ng的質(zhì)粒DNA 到細(xì)胞中,用手指bo打管底,輕輕混勻。

2. 冰水浴中放置30分鐘,不要晃動。

3. 42℃熱擊60秒鐘,不要晃動。

4. 冰水浴中放置2分鐘,不要晃動。

5. 加入500μL的室溫的SOC或LB培養(yǎng)基。

6. 置于37℃搖床中,150-200rpm,復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有氨芐青mei素抗性的LB平板上。待液體吸干后,倒置平板37℃培養(yǎng)12-24 小時。

(平板劃線分離法:復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后,12000rpm 離心30秒鐘,棄掉上清,留100μL左右的液體,用200μL 吸頭輕輕吹打散菌塊, 取10μL重懸的菌液分多點滴在平板上,傾斜吸頭,用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來回劃線。這個方法可以獲得更大的單克隆菌落)。

注意事項:

1.感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃,不可反復(fù)凍融,否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2.實驗過程中應(yīng)嚴(yán)格無菌操作,防止其它DNA或雜菌的污染,避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3.轉(zhuǎn)化時,轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比,但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4.轉(zhuǎn)化率的計算:轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5.為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,可以保留部分連接產(chǎn)物,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到*低。

 

Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞   載體構(gòu)建


產(chǎn)品訂購信息

C9938 Tuner(DE3)感受態(tài)細(xì)胞  10×100μl


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