諾博萊德 膜蛋白提取試劑盒

膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品貨號：P4904

產品名稱：膜蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：膜蛋白提取試劑盒

規格：50T ; 100T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P4904 膜蛋白提取試劑盒

適用樣本：動物細胞/組織

產品介紹

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和動物組織提取總膜蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性 分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

使用前請注意：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產品介紹：

膜蛋白提取試劑盒是一種快速高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，

適用于從動物細胞和動物組織提取總膜蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套。

產品特點：

1. 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時間縮短至 1 小時

3. 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

操作步驟：

一、使用注意事項

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

6. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

7. 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

8. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

9. 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

二、細胞膜蛋白提取

1. 提取液準備：

每 500μL 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μL 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 5-10×106 個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 5min，小心吸取培養基，盡可能吸干收集細胞。

3. 用冷 PBS 洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4. 細胞樣品中加入 200μL-400μL 冷的試劑 A，充分混勻。

5. 在 2-8℃條件下振蕩 20-30min，至細胞充分裂解，細胞沉淀明顯減少。

6. 在 4℃，12000×g 條件下離心 5min。

7. 將上清吸入另一干凈離心管，在 37℃水浴 5-10min。

8. 在 37℃，1000×g 離心 5min，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 30-50μL。

9. 小心移除上層液體，收集上層部分留作備用分析。

10. 用150-200μL冰冷的試劑B充分溶解下層膜蛋白部分，混勻后冰浴2min，37℃水浴5-10min，37℃，1000×g 離心 5min，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為 30-50μL。小心移除上層液體，保留下層。

11. 按以上步驟再次抽提下層膜蛋白(此步驟可以選做，一般不需要做)。

12. 用 50-200μL 冷的試劑 C 膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分，即得膜蛋白

13. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

三、組織樣本膜蛋白提取

1. 提取液準備：

每 500μL 冷的蛋白提取液 A 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每 500μL 膜蛋白溶解液 C 中加入 2μL 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2. 取 50mg-100mg 適量組織樣本，用冷 PBS 洗干凈，然后用手術jian刀盡可能剪碎，加 400μL冷的試劑 A，用組織勻漿機/器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

3. 將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在 4℃條件下振蕩 20-30min。

4. 按照細胞蛋白的提取方法的第（5）步驟往下操作即可。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低？

膜蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，需要盡可能加大細胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。處理部分組織樣本時可能沒有裂解wan全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑 A 的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白？

建議用 BCA 法。不適合用 Bradford 法，因為試劑 A 中含有干擾 Bradford 法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用 Bradford 法定量。

3. 膜蛋白電泳沒有條帶？

膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。蛋白加 Loading buffer 后可以不用煮沸，采用 50℃保溫 30min。蛋白 Loading buffer 中 SDS 終濃度含量可以提高至 3%-10%。有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。電泳時最好采用低電壓低電流電泳。膜蛋白豐度通常較低，有條件可以嘗試用銀染染色。

4. 提取的蛋白具有活性嗎？本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

注意事項：

1. 本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

3. 實驗完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

4. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

5. 如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應立即用水沖洗。

膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品訂購信息：

P4904  膜蛋白提取試劑盒  50T/100T