諾博萊德 昆蟲膜蛋白提取試劑盒

昆蟲膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品貨號：P5010

產品名稱：昆蟲膜蛋白提取試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：昆蟲膜蛋白提取試劑盒

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5010 昆蟲膜蛋白提取試劑盒

產品簡介：

昆蟲細胞膜蛋白提取試劑盒是一種高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑，適用于從昆蟲組織或培養細胞中溫和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白復合物。用本試劑盒抽提和富集到的蛋白包括從分子量很小到很大的蛋白，單次跨膜至 7 次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白復合物。提取過程簡單方便，可在 1 小時內完成。提取的膜蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

適用樣本：昆蟲

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

產品特點：

1.使用方便，從昆蟲細胞，組織中提取蛋白不需經過反復凍融、超聲破碎等前處理。

2.將蛋白提取的時間縮短至 30 分鐘-1 小時。

3.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含 7 種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。

6. 膜蛋白電泳時 loading buffer 應該避免煮沸。

7. 膜蛋白電泳時可以提高 loading buffer 的 SDS 含量。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

每 500μl 提取液 A 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。

4) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取 50mg 昆蟲組織樣本用手shu剪刀盡可能剪碎，加入 500μl 提取液 A 后，用勻漿機/勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 也可以置于研缽中用液氮研磨。

2) 沒有液氮也可直接加入提取液 A 后置冰上研磨即可。

3) 樣本數量根據實驗情況調整，每次的裂解液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。

由于膜蛋白含量較少，需要較多的組織或細胞才能保證得率。

3. 將勻漿液移入一個預冷的干凈離心管中，在 2-8℃振蕩 1 小時。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下處理。

2) 使用振蕩器/搖床的較低轉速，保持提取液稍微晃動即可。

3) 如果沒有 2-8℃振蕩條件，也可 2-8℃冰箱靜置 1 小時，中間每隔 10 分鐘渦旋混勻。

4. 將提取液在 2-8℃低溫下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

5. 在上清中加入 10μl 提取液 B，充分混勻。

6. 在 37℃水浴 10 分鐘。

7. 在 37℃ 1000×g 離心 3 分鐘。

【注】：

1) 必須在 37℃條件下離心。

2) 沒有 37℃離心條件也可以不離心，稍微延長 37℃水浴時間，至液體澄清，分層清晰。

8. 此時溶液會分為 2 層，小心移除上層，留下管底部下層大約 50μl 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

9. 用 50-150μl 試劑 C 溶解該溶液，即得膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

昆蟲膜蛋白提取試劑盒 常備現貨

產品訂購信息：

P5010  昆蟲膜蛋白提取試劑盒  50T/100T