諾博萊德 內質網提取試劑盒（低速離心法）

內質網提取試劑盒（低速離心法）  蛋白提取

產品貨號：P5110

產品名稱：內質網提取試劑盒（低速離心法）

產品規格：50T/100T

產品簡介：

中文名稱：內質網提取試劑盒（低速離心法）

規格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder P5110 內質網提取試劑盒（低速離心法）

產品簡介：

內質網存在于除哺乳動物成熟的紅細胞外的各種真核細胞中。內質網為由生物膜構成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細胞外隙和細胞漿基質之間不直接相通。這種細胞內的膜性管道系統一方面構成細胞內物質運輸的通路，另一方面為細胞內各種各樣的酶反應提供廣闊的反應面積。內質網的功能與蛋白質的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關，并且還具有運輸蛋白質的功能。

傳統的內質網提取方法需要采用較高的離心力或者采用密度梯度離心，對實驗室離心機設備要求較高，對實驗的操作細致程度要求較高。如果實驗室沒有能達到 50000×g 以上的離心力的設備，則沒法進行提取。

內質網提取試劑盒（低速離心法）只需要達到 20000×g 以內的離心力即可提取內質網，一般的常規臺式離心機均可以滿足使用要求。

本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的內質網的提取。

適用樣本：動物細胞/組織

注：

1. 有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。

2. 試劑拆封后請盡快使用完！

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒有 Dounce 勻漿器，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是內質網蛋白回收率會下降。

二、細胞內質網提取：

1. 取 1-2×10⁷ 個細胞，在 4℃，500×g 條件下離心 2-3 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸

干，收集細胞；

2. 用冷 PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器勻漿充分勻漿，然后在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個來回為一次。

5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6. 將上清在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘。

7. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8. 將上清在 4℃，12000-16000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，留上清。

9. 在上清中加入 125ul 試劑 B，充分混勻。

【注】：

1) 試劑 B 使用前請充分混勻。

10. 置 2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

1) 靜置保存時間不少于 10 小時。

11. 在 4℃條件下，10000×g 離心 20-45 分鐘。

12. 小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

1) 盡可能吸干上清。

2) 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13. 沉淀即為內質網。

三、組織內質網提取：

1. 取 50-100mg 新鮮動物組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 下，至無明顯固體團塊。然后在 4℃，1000×g 力條件下離心 5 分鐘。

【注】：

1) 先用 Dounce 勻漿器的松型槌初步勻漿 10-20 次，再用緊型槌勻漿 20-30 次。

2) 每上下一個來回為一次。

5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

6. 在 4℃，11000×g 力條件下離心 10 分鐘。

7. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管。棄沉淀。

8. 將上清在 4℃，12000-16000×g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，留上清。

9. 在上清中加入 125ul 試劑 B，充分混勻。

【注】：

1) 試劑 B 使用前請充分混勻。

10. 置 2-8℃冰箱靜置過夜。

【注】：

1) 靜置保存時間不少于 10 小時。

11. 在 4℃條件下，10000×g 離心 20-45 分鐘。

12. 小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

1) 盡可能吸干上清。

2) 吸取時小心，防止吸掉沉淀。

13. 沉淀即為內質網。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得優良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

7. 低速離心法分離出的細胞器純度一般在 50-65%,具體數據根據實際操作情況會有所不同, 不適用于進行蛋白定位的研究及驗證。

內質網提取試劑盒（低速離心法）  蛋白提取

產品訂購信息：

P5110  內質網提取試劑盒（低速離心法）  50T/100T