諾博萊德 超氧陰離子含量檢測試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

超氧陰離子含量檢測試劑盒 抗逆系列

產品貨號：BC9073

產品名稱：超氧陰離子含量檢測試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

產品規格：100T/96S

產品簡介：

自備試劑：該試劑盒實驗過程中需自備試劑，詳情見網站說明書

中文名稱：超氧陰離子含量檢測試劑盒

英文名稱：Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

別名：超氧陰離子試劑盒 超氧陰離子測試盒

規格：100T/96S

檢測方法：微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲存條件：Store at 2-8℃，6 months

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

NobleRyder BC9073超氧陰離子含量檢測試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

測定意義：生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測定原理：超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據A530值可以計算樣品中O2－含量。

需要的儀器，耗材:天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

表中標準管測定。

產品說明：

生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO₂，NO₂在對氨基苯磺酰胺和萘乙二胺鹽酸鹽的作用下，生成紫紅色的偶

氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根據A₅₃₀值可以計算樣本中O₂含量。

技術指標:

最di檢出限:0.001 μmol/mL

線性范圍:0.0015-0.25 μmol/mL

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、天平、水浴鍋、離心機、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、氯仿(>98%，AR)、冰和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻)

1.組織:按照質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g，加入1mL提取液)加入提取液，冰浴勻漿后，12000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2.細胞/細菌:按照細胞/細菌數量(106個):提取液體積(mL)為5~1:1的比例(建議5百萬細胞/細菌加入1mL提取液)，冰浴超聲波破碎細胞/細菌(功率200w，超聲3秒，間隔10秒，總時間3min):12000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上待測

3.血清/血漿等液體:直接測定。若有渾濁，離心后取上清使用。

二、測定步驟:

1.分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至530nm，分光光度計用蒸餾水調零。

三、超氧陰離子含量計算公式:

1. 按照樣本質量計算:

超氧陰離子含量(μmol/g質量)2xΔA 測定+(△A標準+C標準)xV提取÷W

=0.0625xΔA 測定÷ΔA標準÷W

超氧陰離子產生速率(μmol/min/g質量)=2xΔA測定÷(△A標準+C標準)xV 提取+W+T

=0.003125xΔA 測定+△A標準+W

2.按照樣本蛋白質濃度計算:

超氧陰離子含量(μmol/mg prot) =2x△A測定+(△A標準+C標準)xV樣本+(V樣本xCpr)

=0.0625xΔA 測定-△A標準+Cpr

超氧陰離子產生速率(umol/min/mg prot)= 2xΔA測定+(△A標準+C標準)xV 樣木+ (V 樣木xCpr) ÷T

=0.003125xΔA 測定÷ΔA 標準÷Cpr

3.按照液體樣本體積計算:

超氧陰離子含量(umol/mL) =2xΔA 測定+(△A標準+C標準)

=0.0625xΔA 測定÷△A標準

超氧陰離子產生速率(μmol/min/mL) =2xΔA 測定÷(△A標準+C標準)÷T

=0.003125xΔA 測定÷△A標準

4.按照細胞/細菌數量計算:

超氧陰離子含量(μmol/106cell)=2xΔA 測定+(ΔA標準+C標準)xV提取+N

=0.0625xΔA 測定÷△A標準+N

超氧陰離子產生速率(μmol/min/106cell) = 2xΔA 測定÷(△A標準+C標準)xV提取+N+T

=0.003125xΔA 測定+△A標準+N

C標準:標準管的濃度，0.03125μmol/mL:V樣本:參與反應樣本體積，0.1mL:V提取:提取過程中加入的提取液體積，1mL:Cpr:樣本蛋白質濃度，mg/mL:W:樣本質量，g:N:細胞/細菌數量，以10計:T:反應時間，20min;2:2分子的O2反應生成1分子NO2。

注意事項:

1、若 ΔA 測定<0.01，建議增大樣本量或延長第一步反應時間后測定:若△a測定>1.2，建議稀釋樣本后進行測定，注意同步修改計算公式。

2、樣本上清液制備好后，立刻進行測定，請勿將樣本進行長時間的低溫保存，以免影響測定結果。

3、試劑四為有機試劑，建議每次吸取時更換吸頭，由于該試劑有一定的毒性，操作時請做好防護措施。

超氧陰離子含量檢測試劑盒 抗逆系列

產品訂購信息：

BC9073超氧陰離子含量檢測試劑盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit 100T/96S