諾博萊德 Universal Total RNA Kit通用型總 RNA 提取試劑盒

通用型總RNA快速提取試劑盒

目錄號：91013

產品內容

自備試劑

無水乙醇

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介

采用 Trizol 試劑與離心吸附柱結合提取總RNA的方法，簡化了RNA提取的流程，與經典的異丙醇沉淀法相比，柱式純化方法簡便，去除雜質能力更強，大大提高了 RNA 的純度。該試劑盒可從各種細胞或組織（動物、植物、血液）中快速提取總 RNA，每個吸附柱每次可處理 50-100 mg 組織或 5×10⁶ 細胞，可同時處理大量不同樣品。一個小時內即可完成反應，提取的總RNA沒有 DNA 和蛋白的污染，可用于 Northern Blot、Dot Blot、PolyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護分析和分子克隆。

產品特點

1. RNA 純度更高；

2. 應用廣泛：可提取多種不同的樣本材料。

3. 本公司生產的 Universal Total RNA Kit 質量優異，可以wan美替代 Thermo的 TRIzol Plus RNA Purfication Kit。

4. 可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機；亦可以兼容 4℃離心機。

注意事項

1. RNA 在裂解液 RL 中時不會被 RNase 降解，但后續處理過程中應使用不含RNase的吸頭和玻璃器皿，璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水che底洗凈，再高壓滅菌。

2. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

3. 樣品加入裂解液 RL（RNAzol）勻漿后，加氯仿前，樣品可在–80℃保存一個月以上。

4. 取 RNA 樣本時，把新鮮組織樣本浸入 RNAsafe (RNA 樣品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

操作步驟

第一次使用前，請先在漂洗液 RW 中加入zhi定量無水乙chun，詳見瓶上的標簽。

提示：所有離心步驟均可在室溫（15~37℃）下進行，提取效果更佳！

1. 材料處理：

a．組織（動物、植物、真菌）：將組織在液氮中磨成細粉。每 30~50 mg 動物組織加 1ml 裂解液RL，每50~100 mg植物/真菌組織加 1ml 裂解液RL，渦旋 15sec。樣品體積不應超過裂解液RL體積的10%。

b．單層貼壁培養細胞：吸去培養液，加入適量裂解液RL，每 10cm2 加1ml裂解液RL，用移液器抽打幾次。

c． 細胞懸液：離心收集細胞，棄上清，每 5×10⁶ 個細胞加1ml裂解液RL。加裂解液 RL 前不要洗滌細胞，以免降解mRNA。

d．血液：取新鮮血液，加入5倍體積裂解液RL，（推薦0.2ml血液+1 ml 裂解液 RL ），充分振蕩混勻。

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得核酸蛋白復合物wan全分離。

3. 可選步驟：12,000 rpm 離心 5 min，轉移上清至一新的離心管中。

（注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結節部位等可加此步驟離心去除，離心得到的沉淀中含有細胞外膜、多糖、高分子 DNA 等，RNA 存在于上清液中）

4. 向上清（或裂解液混合液）中加入等體積的無水乙醇，混勻，此時可能會出現沉淀，每次將≤750 ul 溶液和沉淀一起轉入RNA吸附柱中，12,000rpm離心1 min，倒棄濾液，若一次不能轉移wan全，可分次轉移。

5. 向吸附柱內加入500 ul 去蛋白液 RE，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄

濾液。

6. 向吸附柱內加入500ul漂洗液RW，12,000rpm離心1 min，棄濾液。

（注意：請檢查漂洗液 RW 中是否已按要求加入無水乙醇！）

7. 重復步驟 6 一次。

8. 將RNA吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2min，甩干膜上殘

留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入一個新的RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50~100ul RNase-Free ddH₂O，室溫放置2min，12,000 rpm離心1 min，管底即RNA 溶液。

10. 提取的RNA可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以防降解。

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