諾博萊德 Serum/Plasma miRNA Mini Kit

血清/血漿 microRNA 快速提取試劑盒

血清/血漿microRNA提取試劑盒

目錄號(hào)：91416

產(chǎn)品內(nèi)容

自備試劑

無(wú)水乙chun、lv仿

保存條件

室溫（15 ~ 25℃）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮型的 Trizol )，配合 miRNA 專用的溶液體系，專用于從動(dòng)物及人體血漿和血清中提取miRNA 和其它各種小 RNA(15-30 nt )。

可以提出來(lái)包含 miRNA 的總 RNA，用于 miRNA 的 RT、qPCR 檢測(cè)，以及全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等；根據(jù)需要，也可以一次性把 miRNA 和總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分別提出來(lái)。

近年來(lái)對(duì) RNA 干擾和調(diào)節(jié)性小 RNA 的廣泛研究迫切需要一種能有效提取 15-30 核苷酸左右大小 RNA（包括 siRNA 和 miRNA）的試劑盒。但是市場(chǎng)上常見(jiàn)的離心柱型的 RNA Kit/總 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有專題文章闡述），對(duì)于血清血漿樣本更是由于其自身特點(diǎn)更難提取。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1. Serum/Plasma miRNA Mini Kit 質(zhì)量?jī)?yōu)異，可以wan美替代 Qiagen 的miRNeasy Serum/Plasma Kit。

2. 本品可在常溫下提取 RNA，不需要 4℃離心機(jī)；亦可以兼容 4℃離心機(jī)。

注意事項(xiàng)

1. 血液 RNA 的常溫保存/運(yùn)輸/提取的簡(jiǎn)易方案：

臨床取樣：在臨床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鮮血液，加入 750μl的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液槍反復(fù)抽打并振蕩混勻，在室溫裂解 5~10 min，直至血細(xì)胞充分發(fā)生裂解。

保存：經(jīng)裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 個(gè)月，在-70℃保存半年。

運(yùn)輸：可冰袋 4℃運(yùn)輸 1 天，干冰-20℃運(yùn)輸一周。

提取：后續(xù) RNA 提取按 R213（或 R012）的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2. RNA 純度及濃度檢測(cè)：

血清/血漿的 RNA 含量特別低，已經(jīng)低于分光光度計(jì)測(cè)量的下限，無(wú)法準(zhǔn)確測(cè)量，因此無(wú)法通過(guò)測(cè)量 OD 值或者比值的方法來(lái)判斷濃度或者純度，只能通過(guò)下游做 RT-qPCR 來(lái)判斷產(chǎn)量。同時(shí)無(wú)細(xì)胞的血清/血漿中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑電泳檢測(cè) RNA 完整性并不適用于血清/血漿 RNA。

3. Wash Solution 2/3 可能加入乙chun使用幾天后，可能會(huì)出現(xiàn)沉淀晶體，并不影響使用，取其上清直接使用就可以。

操作步驟 （得到包含 microRNA 的總 RNA）

提示：

第一次使用前，請(qǐng)先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入

無(wú)水乙chun，加入量詳見(jiàn)瓶上的標(biāo)簽。

1. 每 250 μl 液體樣品 (血清，血漿，腦脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反復(fù)抽打幾次，然后劇烈震蕩 15 sec，充分混勻。（液體樣品和裂解液 RLS 的終體積比總是 1：3）

注意：對(duì)于含有高污染物樣品（如：高蛋白高血脂樣品），可以適當(dāng)減少處理量，用 RNase-free H₂O 補(bǔ)足250μl后開(kāi)始提取。

（例如：200μl樣品+50μl RNase-free H₂O + 750μl 裂解液 RLS。）

2. 將勻漿樣品在室溫下放置 5 min，使得he酸蛋白復(fù)合物wan全分離。

3. 加入 200μl lv仿，劇烈振蕩 15 秒，并在室溫下放置 2 min，

4. 13,000 rpm 離心 10 min。樣品會(huì)分成三層：上層無(wú)色的水相、中間層、下層有機(jī)相。RNA 存在于水相中，水相層的體積大約為所加裂解液 RLS體積的 70%。

5. 轉(zhuǎn)移上清（約 450 μl）至一個(gè)新的離心管中，加入 1.5 倍體積（675 μl）的無(wú)水乙chun，吹打混勻。

6. 轉(zhuǎn)移上清混合液（每次小于 750 μl，多則分 2 次）至 RNA 吸附柱中，12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

7. 向 RNA 吸附柱內(nèi)加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

8. 向 RNA吸附柱內(nèi)加入 500 μl Wash Solution 2/3（檢查是否已加入乙chun），12,000 rpm 離心 1 min，倒棄濾液。

9. 重復(fù)步驟 8 一次。

10. 將 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2 min，除去膜上殘留的乙chun。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-Free ddH2O，室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min，管底即包含 microRNA 的總 RNA。

12. 得到的 miRNA，可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

相關(guān)產(chǎn)品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 +71419-500）

血清/血漿microRNA提取試劑盒